培養(yǎng)基溶解配制用水加熱滅菌PH廢棄處理問題集錦
- 發(fā)布時間:2017-08-30
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培養(yǎng)基溶解配制用水加熱滅菌PH廢棄處理問題集錦
1、培養(yǎng)基配制用水培養(yǎng)基配制用水最好是蒸餾水,用純凈水和去離子水有可能會影響最終結(jié)果,原因在于:用于制備純凈水和去離水的原水中如果存在大量的微生物的話,雖然在制備過程中能夠除去微生物,但不能除去微生物代謝產(chǎn)物,這些代謝產(chǎn)物可能會影響或抑制細菌的生長!另外,水的電阻率在25℃時應(yīng)≥300000Ω•cm。具體可參考SN/T1538.1-2016.培養(yǎng)基制備指南 第一部分:實驗室培養(yǎng)基制備質(zhì)量保證通則[S]。
GB4789.28中規(guī)定實驗用水的電導(dǎo)率在25℃時不應(yīng)超過25 μS/cm(相當于電阻率≥0.4 ΜΩcm),除非另有規(guī)定要求。水的微生物污染不應(yīng)超過103 CFU/mL。
pH 5.5-7.5,否則可能造成培養(yǎng)基顏色異常、產(chǎn)生沉淀或凝膠強度下降。
儲存于惰性容器(如:玻璃、聚乙烯材質(zhì)容器)中,容器應(yīng)清洗干凈,
防止抑制劑殘留。
2、培養(yǎng)基配制溫度
濕熱滅菌在高壓鍋或培養(yǎng)基制備器中進行,高壓滅菌一般采用121 ℃±3 ℃滅菌15 min,具體培養(yǎng)基按食品微生物學(xué)檢驗標準中的規(guī)定進行滅菌。培養(yǎng)基體積不應(yīng)超過1000 mL,否則滅菌時可能會造成過度加熱。加熱后采用適當?shù)姆绞嚼鋮s,以防加熱過度。這對于大容量和敏感培養(yǎng)基十分重要,例如含有煌綠的培養(yǎng)基。
某些培養(yǎng)基不能或不需要高壓滅菌,可采用煮沸滅菌,如SC肉湯等特定的培養(yǎng)基中含有對光和熱敏感的物質(zhì),煮沸后應(yīng)迅速冷卻,避光保存;有些試劑則不需滅菌,可直接使用(參見相關(guān)標準或供應(yīng)商使用說明)。
3、培養(yǎng)基配制容器
制備培養(yǎng)基常用的容器為玻璃、不銹鋼、鋁鍋或搪瓷容器。不宜使用銅或鐵鍋。培養(yǎng)基中的含銅量過高時(>0.3mg/1000ml),細菌不易生長;含鐵量過高時(>0.14mg/1000ml),則妨礙細菌毒素的產(chǎn)生。
4、培養(yǎng)基溶解
小心稱量所需量的脫水合成培養(yǎng)基(必要時佩戴口罩或在通風柜中操作,以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末),先加入適量的水,充分混合(避免在濕度過高的環(huán)境下操作,防止培養(yǎng)基受潮結(jié)塊),然后加水至所需的量后適當加熱,并重復(fù)或連續(xù)攪拌使其快速分散,必要時應(yīng)完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應(yīng)浸泡幾分鐘。
有顆粒劑的培養(yǎng)基推薦使用顆粒劑培養(yǎng)基,減少粉塵吸入。
加水溶解后,應(yīng)適當加熱并攪拌,加快培養(yǎng)基的溶解。推薦使用帶加熱功能的磁力攪拌器加速溶解。
5、培養(yǎng)基煮沸加熱
培養(yǎng)基煮沸滅菌用的什么加熱工具
答1:我們用磁力加熱攪拌器,一般用來煮500ml的,可能我們樣品量少
答2:我們用電磁爐,放在帶刻度的不銹鋼缸子里煮,加熱的時候用藥匙攪拌
答3:為您提供一種快速便捷的方式
第一步:采用微波爐適當加熱,短時間(10s左右)多次加熱溶解,避免溢出。第二步:在電爐上繼續(xù)加熱至沸騰
電爐,按需配置一定量裝錐形瓶,墊石棉網(wǎng)煮沸,不間斷拿下?lián)u勻,避免溢出。
答4:用過老式電爐+石棉網(wǎng)、電熱套、微波爐、電陶爐;綜合安全和效率,覺得還是電陶爐好用些
6、培養(yǎng)基復(fù)溶
經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)基應(yīng)盡量減少重加熱時間,避免過度加熱。培養(yǎng)基融化后放入47±2℃的恒溫水浴鍋中保溫,直至使用,放置時間一般不應(yīng)超過4h。*如果不能在4h內(nèi)及時使用,應(yīng)迅速冷卻,使其凝固,使用前再進行復(fù)溶。
未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養(yǎng)基尤其應(yīng)該注意,融化后時間應(yīng)盡量縮短;* 不可反復(fù)復(fù)溶,否則會影響培養(yǎng)基的pH值和凝膠強度。
恒溫水浴鏈接:
7、培養(yǎng)基滅菌
高壓滅菌、煮沸滅菌、過濾除菌(采用0.2μm的濾膜)
注:用高壓滅菌的方式對培養(yǎng)基進行滅菌時,應(yīng)對培養(yǎng)基的滅菌過程進行監(jiān)控。
• 物理監(jiān)控和生物監(jiān)控 (滅菌指示膠帶,濕熱滅菌生物指示劑鏈接:)
8、培養(yǎng)基分裝
儲存于惰性容器(如:玻璃、聚乙烯材質(zhì)容器)中;將培養(yǎng)的培養(yǎng)基分裝至容器中,培養(yǎng)基的體積不超過所用容器的3/5;培養(yǎng)基滅菌時,總體積應(yīng)小于1000ml;液體培養(yǎng)基如乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基分裝時可使用大容量電子移液器或電子分液器。
9、培養(yǎng)基PH測定
滅菌前后測定培養(yǎng)基的pH值;pH ±0.2;
1 mol/L的 NaOH 或 Hcl來調(diào)整pH值;
商品化的培養(yǎng)基一般不需要調(diào)整pH值,但需測定pH是否在規(guī)定范圍內(nèi)。
固體培養(yǎng)基PH計可使用固體培養(yǎng)基專業(yè)PH計
10、培養(yǎng)基保存
干粉培養(yǎng)基的保存遵循先進先出的原則、保存開封的記錄、超過保質(zhì)期的培養(yǎng)基需丟棄、
開蓋后密封,低于25℃保存、儲存時避免吸水,氧化,污染。
11、廢棄培養(yǎng)基處理
所有污染和未使用的培養(yǎng)基的棄置應(yīng)采用安全的方式,并且要符合相關(guān)法律法規(guī)的規(guī)定。
網(wǎng)友推薦程序:
一、經(jīng)培養(yǎng)的污染材料及廢棄物應(yīng)放在嚴密的容器或鐵絲筐內(nèi),集中放在統(tǒng)一地點,待統(tǒng)一進行高壓滅菌。
二、經(jīng)微生物污染的培養(yǎng)物,須經(jīng)121℃30分鐘高壓滅菌;
三、染菌后的吸管、加樣槍頭,使用后放在5%煤酸皂溶液中,最少浸泡24小時,再經(jīng)121℃30分鐘高壓滅菌;
四、涂片染色沖洗片的液體,一般可直接沖入下水道,烈性菌的沖洗液必須沖在燒杯中,經(jīng)高壓滅菌后,方可倒入下水道。染色玻璃片放入5%煤酸皂中浸泡24小時,煮沸洗滌。做凝集試驗用的玻片或平皿,須經(jīng)高壓滅菌后再洗滌;
五、 打碎的培養(yǎng)物,立即用5%煤酸皂溶液噴灑和浸泡被污染部位,浸泡半小時后再擦試干凈;
六、污染的工作服或進行烈性菌試驗所穿的工作服、帽、口罩等,應(yīng)放在專用的消毒袋內(nèi),經(jīng)高壓滅菌后方能洗滌。
其他培養(yǎng)基相關(guān)內(nèi)容問答
標簽:培養(yǎng)基、高壓滅菌,乳糖膽鹽、分開滅菌
問:1、“請教你一個培養(yǎng)基高壓滅菌的問題。說明書上:平板計數(shù)培養(yǎng)基加熱溶解121攝氏度滅菌15分鐘,乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基經(jīng)115攝氏度15分鐘滅菌。我想問下,我把2者一同在高壓鍋滅菌121到126攝氏度時間20分鐘,這樣可以嗎?或2者一同在高壓鍋滅菌121到126攝氏度時間15分鐘可以嗎?”
答:-----不可以,乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)基經(jīng)115攝氏度15分鐘滅菌的目的是防止高溫導(dǎo)致多糖碳化。
問:“覺得2個培養(yǎng)基分開滅菌覺得浪費,再一起滅菌不知怎樣做才標準”?
-答:----沒有規(guī)矩不成方圓。不可一起滅菌。
標簽:培養(yǎng)基配制
問:在進行煮沸滅菌培養(yǎng)基配置過程中如何避免液體噴灑出來被燙傷的情況,有什么好的滅菌方法,又可以有效防護?
答:選擇大一點的容器,少盛放點培養(yǎng)基,防護最好放上石棉網(wǎng),帶上高溫手套,有專人看守。
標簽:培養(yǎng)基,(試劑)驗收程序
問:4.6.1a)要求制定培養(yǎng)基(試劑)驗收程序;4.6.1b)要求制定培養(yǎng)基質(zhì)量控制程序。
是否可以只制定培養(yǎng)基(試劑)質(zhì)量控制程序,內(nèi)容包括驗收及自制培養(yǎng)基的質(zhì)量控制。
答:貴實驗室自制培養(yǎng)基嗎?如果是,則執(zhí)行GB 4789.28-2013 6.1。
如果否,如使用商業(yè)干粉培養(yǎng)基,則執(zhí)行GB 4789.28-2013 6.2即可
商品化培養(yǎng)基按附件E進行質(zhì)量控制
標簽:培養(yǎng)基保溫
問:滅菌后培養(yǎng)基的保溫能否用60℃的培養(yǎng)箱,它與45~55℃水浴鍋保溫方法有何不同?
答:----最好使用45~55℃水浴鍋保溫方法;
----前者“氣保”,后者“水保”。
標簽:培養(yǎng)基,PH計
問:請問下商品化的培養(yǎng)基驗收時,要測試PH值,有些瓊脂滅菌后25℃時已經(jīng)凝固了,是否可以在滅菌前進行?
答:使用穿插式PH計或平頭電極,有專業(yè)的固體培養(yǎng)基專用電極可測固態(tài)瓊脂pH
問:Vrba培養(yǎng)基勿需高壓滅菌的原因是什么 ?
答:VRBA即結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂具有一定的選擇性,不易生長雜菌,在其上面只大腸菌群顯色,其它的菌落不會顯示顏色的。再說,煮沸也是滅菌。
VRBA菌落顯紅色的原理是菌株利用乳糖產(chǎn)酸,中性紅遇酸變紅,因此菌落也是紅色的,并且因為里面有膽鹽,在較低pH值時會出現(xiàn)沉淀環(huán),就是我們看到的菌落周圍的暈圈了。
但某些不利用乳糖產(chǎn)酸的細菌如沙門在VRBA表面生長時是無色的,但是跑到培養(yǎng)基內(nèi)部就會變成紅色了,這種菌會影響我們的判斷,因此需要做BGLB來確證。
培養(yǎng)基配制用什么容器
問:每天需要用大量培養(yǎng)基,用2L燒杯配制還是嫌小了,如果用大的不銹鋼鍋,每批就可以配很大量,不知道有什么不符合的說法嗎?是分裝到三角燒瓶或者試管再滅菌的。主要考慮到批次管理,所以想一次性用一個大鍋來溶解干粉,以鍋作為一個實驗室培養(yǎng)基批次。不知道是否可行?
答:可以的,先用一個大的不銹鋼配制好,然后分裝到三角燒瓶或試管在滅菌
追問:每個月有一兩天需要配制上千瓶培養(yǎng)基,考慮分裝的問題,有誰使用過蠕動泵之類的分裝設(shè)備???從配制到滅菌之間的時間怎么控制才好?記得USP里面有規(guī)定2小時內(nèi),但是分裝的量大呀……
答:可以考慮培養(yǎng)基分裝器(蠕動泵)
問:培養(yǎng)基煮沸滅菌(無需高溫高壓)具體都怎么操作。比如煮沸過程要加塞子么,煮沸后直接進入無菌室冷卻倒板還是放水浴鍋等等
答:煮沸過程當然要蓋上啊,但是不建議用塞子,可以用錫紙啊,另外有時刻看著啊
煮沸后直接進入無菌室冷卻倒板還是放水浴鍋等等,應(yīng)該都可以吧??!反正是冷卻過程啊
問:怎樣制作斜面培養(yǎng)基呢
答:配制固體培養(yǎng)基,分裝入試管,包扎,滅菌,擺斜面,冷卻即可
主要把握分裝的量~~
問:一個培養(yǎng)箱,培養(yǎng)兩種不同溫度的培養(yǎng)基,怎么培養(yǎng)?
答:你說的可能是細菌培養(yǎng)、霉菌培養(yǎng),這要兩個培養(yǎng)箱,霉菌培養(yǎng)不僅有溫度要求還有濕度要求。
其他回答:做無菌檢查至少要2個培養(yǎng)箱
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