人工游泳池水微生物指標(biāo)

GB37488-2019公共場所衛(wèi)生指標(biāo)及限制要求中對人工游泳池水質(zhì)指標(biāo)衛(wèi)生要求水質(zhì)監(jiān)測項(xiàng)目包括池水溫度、pH值、渾濁度、尿素、游離性余氯、細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群等指標(biāo) 。每個游泳池取2-3個水樣進(jìn)行檢測。
其中:細(xì)菌總數(shù)指標(biāo)：≤200CFU/ml
大腸菌群指標(biāo)：不得檢出（CFU/100ml或MPN/100ml)
人工游泳池水微生物檢測方法
GB37488-2019公共場所衛(wèi)生指標(biāo)及限制要求中5.2  游泳池水溫度、尿素 透明度和沐浴用水中嗜肺軍團(tuán)菌的檢驗(yàn)按GB/T18204執(zhí)行，游泳場水、沐浴用水水質(zhì)其他指標(biāo)和生活飲用水指標(biāo)檢驗(yàn)按GB/T5750執(zhí)行。
    人工游泳池水微生物項(xiàng)目取樣：GBT5750.2-2006微生物取樣0.5L，取樣工具滅菌瓶。保存方法：每125mL水樣加入0.1mg硫代硫酸鈉去除殘留余氯。低溫0~4攝氏度避光保存，保存時間4小時。
　?。ㄒ唬?strong>細(xì)菌總數(shù)測定
　　1．采樣瓶的要求和預(yù)處理用于微生物分析的采樣瓶要無酸、無堿、無毒的玻璃容器。采樣瓶在滅菌前加入足量的10％（g／ml）硫代硫酸鈉（Na2S2O3）溶液。一般情況下125ml的采樣瓶加0.1ml，加完后12l℃高壓滅菌20分鐘。
　　2．用滅菌吸管吸取均勻水樣1ml，注入到滅菌平皿內(nèi)，另取1m1注入另一滅菌平皿內(nèi)作平行接種。在取1ml加到9ml無菌生理鹽水中作1∶10稀釋，混勻后取2ml分別加到2個無菌平皿內(nèi)，每皿1ml。
　　3．將溶化并冷卻至45℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾注平皿內(nèi)，每皿約15ml，另取一個不加樣品的無菌平皿作空白對照。立即旋搖平皿，使水樣和培養(yǎng)基充分混勻。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿，置36℃±1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)48小時。
菌落計數(shù)方法
  先用肉眼觀察，點(diǎn)數(shù)菌落數(shù)，然后再用放大5~10倍的放大鏡檢查，以防遺漏。記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)，若平皿中有連成片狀的菌落或花點(diǎn)樣菌落蔓延生長時，菌落計數(shù)后乘以2，所得結(jié)果代表全皿菌落數(shù)。
　?。ǘ?strong>大腸菌群測定
　　1．多管發(fā)酵法在2個裝有50ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養(yǎng)液的大試管或燒杯內(nèi)各加入水樣100ml。在10支裝有5ml三倍濃縮乳糖膽鹽培養(yǎng)液的試管里各加入水樣10ml。輕搖試管，使液體充分混勻，置36℃±1℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)24小時。觀察每管是否產(chǎn)氣，如不產(chǎn)氣則報告為大腸菌群陰性；若有氣體產(chǎn)生則為推測性試驗(yàn)陽性，需做進(jìn)一步的證實(shí)試驗(yàn)。
　　2．濾膜法
　　（1）濾膜滅菌：將濾膜放入含蒸餾水的燒杯中，煮沸滅菌3次，每次15分鐘。前兩次煮沸后需更換水洗滌2～3次，以除去殘留溶劑。
　　（2）濾器滅菌：用121℃高壓滅菌20分鐘或用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌。
　　（3）水樣過濾：用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在濾床上。固定好濾器，將100ml水樣（如水樣含菌數(shù)較多，可減少濾水樣量或?qū)⑺畼酉♂專┳⑷霝V器中，打開濾器閥門，在-0.5大氣壓下抽濾。
（4）培養(yǎng)：水樣濾完后，再抽氣約5秒鐘，關(guān)上濾器閥門，取下濾器。用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在乳糖瓊脂分離培養(yǎng)基上，濾膜截留細(xì)菌面向上，濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基完全貼緊，兩者之間不得留有氣泡。然后將平皿倒置，放人360℃±1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時。
3. 酶底物法
水樣稀釋
檢測所需水樣為100mL。若水樣污染嚴(yán)重，可對水樣進(jìn)行稀釋。取10mL水樣加入到90mL滅菌生理鹽水中，必要時可加大稀釋度。
定性反應(yīng)
用100mL的無菌稀釋瓶量取100mL水樣，加入酶底物培養(yǎng)基粉末，混搖均勻使之完全溶解后，放入36℃±1℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h.
結(jié)果判定（定性反應(yīng)）
水樣經(jīng)24h培養(yǎng)之后如果顏色變黃色，判斷為陽性反應(yīng)，表示水中含有總大腸菌群。水樣顏色未發(fā)生變化，判定為陰性反應(yīng)。定性反應(yīng)結(jié)果以總大腸菌群檢出或未檢出報告。
 
      酶底物法測定大腸菌群原理：
酶底物法采用 ONP（鄰硝基苯）這種試劑可以被大腸菌群的β-半乳糖苷酶分解代謝。
當(dāng)大腸菌群在酶底物檢測試劑中生長時,其使用 β-半乳糖苷酶 分解代謝 ONPG,并使大腸菌群從無色變?yōu)辄S色。

HJ 1001-2018 水質(zhì) 總大腸菌群、糞大腸菌群和大腸埃希氏菌的測定 酶底物法術(shù)語
3.1 總大腸菌群 total coliforms
      37℃培養(yǎng)24 h，能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase)，分解選擇性培養(yǎng)基中的鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG）生成黃色的鄰硝基苯酚的腸桿菌科細(xì)菌。
3.2糞大腸菌群 fecal coliforms
      又稱耐熱大腸菌群（thermotolerant coliforms)。 44.5℃培養(yǎng)24 h，能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶 (β-D-ga1actosidase)，分解選擇性培養(yǎng)基中的鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG）生成黃色的鄰硝基苯酚的腸桿菌科細(xì)菌。
3.3大腸埃希氏菌 Escherichia coli
      俗稱大腸桿菌。37℃培養(yǎng)24 h，能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶(β-D-ga1actosidase)，分解選擇性培養(yǎng)基中的鄰硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG）生成黃色的鄰硝基苯酚，同時產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-Glucuronidase)，分解選擇性培養(yǎng)基中的4-甲基傘形酮-β-D-葡萄糖醛酸苷（MUG）釋放出熒光物質(zhì)（4-甲基傘形酮）的腸桿菌科細(xì)菌。
 
人工游泳池檢測指標(biāo)細(xì)菌總數(shù)與大腸菌群，簡易微生物實(shí)驗(yàn)室即可開展這2個微生物實(shí)驗(yàn)。
人工游泳池水微生物檢測試劑儀器耗材

產(chǎn)品名稱
100mL無菌采樣瓶	含硫代硫酸鈉
無菌生理鹽水	9mL*20支
營養(yǎng)瓊脂平板	90mm*20個
大腸菌群酶底物法試劑盒	100個/盒
恒溫培養(yǎng)箱	37℃
烘箱	玻璃儀器
移液管	1ml ,10ml或移液器
一次性涂布棒	獨(dú)立包裝

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