熒光試驗(yàn)結(jié)果觀察

       日常試驗(yàn)中，經(jīng)常會(huì)遇到大腸桿菌需要觀察熒光是情況。國(guó)標(biāo)4789.38-2012大腸埃希氏菌計(jì)數(shù)中第二法（VRBA-MUG計(jì)數(shù))，GB/T 5750.12-2006 水及水源水中的大腸埃希氏檢驗(yàn)，《包裝飲用水》 GB19298-2014中銅綠假單胞菌檢驗(yàn)(按照GB/T 8538-2008)都需要觀察熒光，可見(jiàn)熒光結(jié)果觀察的重要性。
       MUG，是4-甲基傘形酮-β-D-半乳糖苷的縮寫(xiě)，該物質(zhì)為β-半乳糖苷酶作用的底物，β-半乳糖苷酶與MUG結(jié)合并剪切β-半乳糖苷鍵，釋放熒光顯色基團(tuán)4-甲基傘形酮，在紫外光（λ=366nm）下觀察，培養(yǎng)物發(fā)出藍(lán)色熒光。
     觀察熒光的條件：
1）紫外光為366nm波長(zhǎng)；
2）在黑暗的環(huán)境下觀察，有助于更好的觀察熒光；
3）紫外燈燈管最好直接照射在待測(cè)平板或試管上，無(wú)玻璃等物品吸收紫外光。
4）使用空白管、陽(yáng)性菌、陰性菌做對(duì)照。
    推薦使用“簡(jiǎn)易便攜式熒光檢測(cè)燈”，不但具備以上三個(gè)要求，而且避免了紫外燈直接照射人的情況，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員有所保護(hù)。
    如使用臺(tái)式紫外燈，建議使用紫外線防護(hù)眼鏡。
空白產(chǎn)熒光原因分析：
1）試管或平皿洗涮不干凈所致。試管或平皿中殘留4-甲基傘形酮，會(huì)導(dǎo)致空白有熒光。
2）觀察熒光的紫外燈不合適。紫外燈波長(zhǎng)雖為366nm，但外側(cè)有玻璃燈罩、或者功率太大（瓦數(shù)太高、燈過(guò)亮）均會(huì)影響熒光效果。
3）試管或平皿本身原因。有些試管或平皿，本身由于質(zhì)量原因，在紫外燈下自身就帶有光亮。使用前，可以先拿幾種試管或平皿裝入蒸餾水，先在紫外燈下觀察一下，然后挑取亮度比較暗的容器使用。
建議：
建議做熒光試驗(yàn)時(shí)，采用陽(yáng)性對(duì)照菌同時(shí)觀察，可更簡(jiǎn)單明了。