微生物常見問題問答--節(jié)選自廣東藥檢所2010藥典微生物專題問答
- 發(fā)布時間:2016-07-06
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微生物常見問題問答(一)
微生物常見問題問答--節(jié)選自廣東藥檢所2010藥典微生物專題問答。
微生物常見問題,藥典培訓專題問答,節(jié)選內容比較具有代表性,部分內容適用于食品,化妝品微生物行業(yè)。
菌落計數(shù)是否需要將每天計數(shù)的數(shù)據(jù)登記在記錄本上,是否可以只記錄最終的數(shù)據(jù)?
答:可以。每天計數(shù)的目的是預防菌落彌漫互相覆蓋,干擾最終的點計。你可以用油性筆將每天點計的數(shù)記錄在培養(yǎng)皿上,發(fā)報告時只要最終菌落數(shù)就行了。
若樣品中有不溶物(如片劑中的輔料顆粒),經(jīng)常會影響培養(yǎng)前期的結果,藥典要求逐日計數(shù),所以報告中會出現(xiàn)第二、三日菌落數(shù)小于第一日的現(xiàn)象,請問該如何向客戶或監(jiān)檢機構解釋這種結果?或者是否可以不計第一、二日菌落數(shù),待輔料顆粒與菌落可以區(qū)分后再計數(shù)?
答:報告書不需要顯示第一、第二天的結果,只需報告最終結果。理由請見第9題答復?;蛘呤窃跔I養(yǎng)瓊脂中加入TTC試劑(每100ml加入0.1%)
采用薄膜過濾法時,濾膜采用何種方法滅菌最好?
答:據(jù)我們經(jīng)驗,最好采用一次性過濾器。如果用多次使用的過濾器,則濾膜用濕熱滅菌比較好,因為干熱滅菌后,濾膜較脆,試驗時不容易保證濾膜完整。
菌液涂布時,用接種棒還是涂布棒涂?
答:用L型涂布棒,也可用玻棒自制。
大腸菌群檢查,需陽性對照嗎?
答:要的。陽性對照菌為大腸埃希菌。
如何避免菌落成片?
答:1、培養(yǎng)基傾注時溫度不宜過高,可減少傾注后培養(yǎng)皿里的水蒸汽太多而造成菌落容易漫延,或者加蓋“陶瓦蓋”吸收水蒸汽;2、細菌計數(shù)時,在每100ml營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中加入滅菌的1%氯化四氮唑0.1ml,可使生成的菌落變紅色,容易點計,也可在一定程度上抑制菌落漫延。
微生物檢驗時,勻漿機應把轉速調到多少才不會對微生物有損傷?
答:沒有相關的規(guī)定,目前一般使用轉速為3000-4000轉/分鐘。
生物指示劑對滅菌設備的性能,滅菌程序的驗證是只驗證一次呢,而后進行定期驗證,如果生物指示劑換批號,是否要重新驗證?
答:應定期或不定期驗證一次,確保滅菌設備正常。生物指示劑更換批號,不需重新驗證。
紫外線滅菌后,需要多久進去操作?
答:打開通風凈化設備,半小時后可入內操作。
培養(yǎng)基在冷藏中形成結晶怎么處理?①銷毀 ②加熱再用 ③待冷卻完用
答:建議不要使用
融化的培養(yǎng)基為什么不能再冷水中冷卻?
答:防止受熱不均引起結塊
商品培養(yǎng)基干粉說是加蒸餾水溶解,實際操作是否可以用純化水或注射用水?
答:只要不含有任何可能抑制或影響微生物生長的物質的水均可。
如何檢查黑曲霉孢子懸浮液孢子含量為50~100個/ml。銅綠假單胞菌單菌如果用甘油冷凍管,也是低溫,是否也會影響它的活性?應如何保存?
答:可用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或改良馬丁瓊脂來確定黑曲霉孢子懸浮液。銅綠假單胞菌應使用最終甘油濃度為20%的甘油凍存管保存,保存在-30℃或更低溫度,則可保持其活性。若是斜面或營養(yǎng)肉湯,建議室溫保存。
第一代菌種可不可以作為工作菌株使用?
答:我們不這樣使用,因為擔心菌株沒有充分復壯,生化特性可能不典型。
制備菌懸液時,要使其在10~100cfu中,應多注意的地方是什么?
答:制定標準化操作規(guī)程,減少不同實驗者帶來的誤差,接種量、培養(yǎng)溫度和時間應每次一致。
銅綠假單胞菌貯存溫度應為多少度?
答:一般在10℃以上,甘油凍存管至少在-30℃以下。
如何比較快速有效判斷菌液的濃度?除了可以用“比濁儀”參考,還有什么方法?
答:比濁儀只做輔助參考,還需通過平板計數(shù)來最后確認菌液的濃度。
若沒有比濁儀,用什么方法來確認50~100cfu/ml?特別是孢子?
答:孢子計數(shù)建議通過平板計數(shù)的方法來確定濃度。
在做方法驗證時,黑曲霉菌濃度大于20cfu/皿時,培養(yǎng)5天后菌落蔓延擴散,無法各個區(qū)分,如何在藥典要求的50~100cfu和實際操作結果中找到平衡?因為菌濃對回收率及操作RSD%影響很多.
答:培養(yǎng)48-72h后,菌落剛形成時,及時點計并做記號,然后每天觀察有無新的菌落長出并計數(shù)。
大腸生化實驗中的靛基質試驗(I)項結果為“+”或者“-”均不影響最終結果的判斷,請問該項的意義何在?是否可以取消?
答:反應為+,為典型大腸埃希氏菌,-為非典型大腸埃希菌。關系到最終判斷,都是必須的實驗,不可取消。
銅綠假單胞菌用什么方法保存及更活處理方法?
答:建議采用甘油凍存管(終濃度為20%的甘油凍存管),-30℃(或更低溫度)保存。
革蘭氏染色前,菌落是否要先純化(接到營養(yǎng)瓊脂斜面上)還是直接從選擇性培養(yǎng)基上挑起菌落直接染色?
答:要純化,從選擇性培養(yǎng)基挑取單個菌落,最好先接到營養(yǎng)瓊脂斜面后,再進行染色。
請介紹一下,有什么簡便的方法滅菌甘油?
答:高壓濕熱滅菌法
20%甘油v∕v是用水還是用相應培養(yǎng)基做稀釋?
答:用相應的培養(yǎng)基。
清潔無菌室所用消毒液如何做到無菌拖把、拖桶如何做到無菌?
答:消毒液可采用過濾的方法。無菌拖把、拖桶可采用浸泡、高溫滅菌的方法。
貴所日常所用的消毒液是哪些?
答:新潔爾滅、消毒粉、75%酒精、來蘇兒。
消毒液本來就是用來消毒殺菌的,又怎么會存在消毒液是否無菌這一說法?
答:消毒液不是萬能的,對絕大對數(shù)菌有效,不排除對有些微生物無效。 有些消毒劑質量難保證,如果有效成分濃度過低甚至無,則達不到滅菌效果。
能否直接用電磁爐煮培養(yǎng)基(加熱)?最佳加熱方法是?
答:電磁爐不能加熱玻璃瓶。我們所:水?。?00℃),微波爐。
生物安全柜,凈化操作臺每年是否需要檢定?
答:是的,我所是每年檢定一次。并定期檢測潔凈度,頻次自己制訂。
潔凈區(qū)監(jiān)控中,某些設備不宜采用沖淋法和接觸碟法取樣,而擦拭法中棉簽釋放率很低(普通棉簽釋放率只有20%左右)。請問如何設計采樣方法才能真實反映設備表面微生物情況?
答:有些國外生產微生物檢驗儀器的大公司,有專用的小拭子,可能更有效。
潔凈區(qū)有霉菌生長,要怎么凈化環(huán)境?注:我們用75%的乙醇抹洗全部空間,然后開臭氧半小時,但是檢測后還是發(fā)現(xiàn)有霉菌,老師是不是還有更好的方法?
答:可嘗試甲醛熏蒸
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