軍團菌PCR檢測試劑盒

【名稱】
通用名稱：軍團菌PCR檢測試劑盒
英文名稱： PCR diagnostic kit for Legionella spp.
【使用方向】
軍團菌PCR檢測試劑盒是快速準(zhǔn)確的定性檢測水中軍團菌數(shù)量的試劑盒，PCR 聯(lián)合酶聯(lián)免疫檢測擴增后樣品的原理，樣品中細菌濃度達10³cfu/ml就可是實現(xiàn)直接檢驗。PCR 過程中，一段特殊的DNA 片段被擴增然后通過和標(biāo)記生物素的探針雜交來檢測。通過底物酶的培養(yǎng)后，樣品的結(jié)果可以通過肉眼判別或者酶標(biāo)儀來讀取。本試劑盒使用嗜肺軍團菌及軍團屬的特異引物，可與樣本中的嗜肺軍團菌及軍團屬基因組的相應(yīng)靶位點特異性結(jié)合，利用PCR反應(yīng)達到對嗜肺軍團菌及其他軍團菌快速檢測的目的。試劑盒具有特異性強的特點，可以將嗜肺軍團菌及其他軍團菌從其它細菌中特異地區(qū)分出來。
 
軍團菌PCR檢測試劑盒用于食品、飲用水、臨床樣品以及環(huán)境樣品中的嗜肺軍團菌及其他軍團菌的檢測。
【樣品處理】
1. 取可疑菌落于高壓滅菌的裝有1ml去離子水的離心管中，12000rpm離心2min，棄上清。
2. 加入200μl無菌水，充分混勻，12000rpm離心2min，棄上清。
3. 加入80μl核酸提取液，用移液器吹吸混勻，50℃水浴1小時，100 ℃ 水浴15分鐘，冰上放置10分鐘后12000rpm離心3min。
4. 取上清液用于PCR檢測。
【使用方法】
1. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
從軍團菌PCR檢測試劑盒中取出PCR反應(yīng)液在室溫融化，將PCR反應(yīng)液充分震蕩混勻，所有試劑在使用前2000rpm離心10s。設(shè)所需要的管數(shù)n（n=樣本數(shù)+1管陽性對照品+1管陰性對照品），每個測試反應(yīng)體系試劑配置如下表。計算所需要的n管反應(yīng)的各試劑的使用量，加入至適當(dāng)體積的無菌離心管中，充分混合均勻，分裝至無菌PCR反應(yīng)管中，每管20μl。每個反應(yīng)體系試劑用量：PCR反應(yīng)液19.7μl ，Taq酶0.3μl
2.  PCR擴增（擴增和產(chǎn)物分析區(qū)）
將樣本、陰性對照品和陽性對照品使用前恢復(fù)至室溫，2000rpm離心10s。向每個
PCR反應(yīng)管中分別加入樣本、陰性對照品和陽性對照品各5μl，震蕩混勻，于2000rpm
離心10s。將PCR管放入PCR儀中，使用以下程序進行擴增反應(yīng)，整個擴增反應(yīng)約
需2小時。
3.   結(jié)果判斷（擴增和產(chǎn)物分析區(qū)）
從PCR管中取出2μl PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。在紫外燈下，陰性對照品沒有任何條帶；軍團菌陽性對照品具有大小為270bp和354bp的兩條帶；其中270bp的條帶為軍團菌屬特異的條帶，而354bp則為嗜肺軍團菌種特異的條帶。當(dāng)被檢樣品經(jīng)電泳檢測出現(xiàn)僅出現(xiàn)270bp大小的條帶時則屬于軍團菌（非嗜肺軍團菌）陽性，若出現(xiàn)270bp和354bp的兩條帶則屬于嗜肺軍團菌陽性；當(dāng)未出現(xiàn)條帶或所出現(xiàn)的條帶大小與陽性對照品的條帶大小不一致時均視為陰性結(jié)果。
【注意事項】
1.   本試劑盒不做臨床診斷。
2.   實驗室管理應(yīng)嚴格按照PCR基因擴增實驗室的管理規(guī)范，試驗人員必須進行專業(yè)培訓(xùn)，實驗過程中嚴格分區(qū)進行（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴增和產(chǎn)物分析區(qū)），實驗操作的每個階段使用專用的儀器和設(shè)備，各區(qū)用品不能交叉使用。
3.  樣本準(zhǔn)備和試劑準(zhǔn)備階段應(yīng)使用生物安全柜，實驗過程中穿工作服，帶一次性手套，使用自卸管移液器。
4.  對每次實驗進行質(zhì)量控制。
5.  試劑使用前要完全解凍，并混合均勻，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
6.  樣本制備區(qū)所用過的吸頭請打入盛有消毒劑的容器，并與廢棄物一起滅菌后方可丟棄。
7.  實驗完畢用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器。
8. 所有檢測樣品應(yīng)視為具有傳染性物質(zhì)，操作和處理均需符合相關(guān)法規(guī)要求：衛(wèi)生部《微生物生物醫(yī)學(xué)實驗室生物安全通用準(zhǔn)則》和《醫(yī)療廢物管理條例》。
【軍團菌PCR檢測試劑盒主要組成部分】

軍團菌PCR檢測試劑盒	組份	規(guī)格	數(shù)量	貯存溫度
	核酸提取液	1ml/支	2支	-20℃
	軍團菌 PCR反應(yīng)液	500μl /支	1支
	Taq酶	12μl /支	1支
	軍團菌陽性對照品	100μl /支	1支
	陰性對照品	100μl /支	1支

【儲藏條件及有效期】    
-20℃保存，避免反復(fù)凍融，有效期一年。
 
 
軍團菌PCR檢測試劑相關(guān)產(chǎn)品：
軍團菌分型血清（大套，中套，小套）
軍團菌生化鑒定套裝（含馬尿酸鹽，硝酸鹽還原等7種生化鑒定試劑）
360nm紫外燈
GVPC平板
BCYE平板
BCYE-CYS平板
軍團菌陽性對照菌株
廈門敏測供應(yīng)以上軍團菌檢測系列產(chǎn)品，詳情請來電咨詢。