軍團(tuán)菌檢測(cè)設(shè)備
軍團(tuán)菌檢測(cè)設(shè)備
軍團(tuán)菌及軍團(tuán)菌?。?/strong>軍團(tuán)病系1976年在費(fèi)城美國(guó)退伍軍人年會(huì)中首次發(fā)現(xiàn)的急性發(fā)熱性肺部疾患而被命名的.軍團(tuán)菌是引起軍團(tuán)病的病原菌,廣泛存在于自然界及建筑給水系統(tǒng)中,特別是封閉式的公共場(chǎng)所.如地鐵、火車站、辦公環(huán)境、醫(yī)院、影劇院、賓館等,城市的大型建筑物中通常配備有中央空調(diào)系統(tǒng)、冷熱水管道以及加濕器,軍團(tuán)菌常常以氣溶膠方式感染人群.軍團(tuán)菌是近20年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的傳染病之一。哪些地方要檢測(cè)軍團(tuán)菌：集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)、循環(huán)冷卻水、冷凝水、沐浴用水、飲用水等。
軍團(tuán)菌檢測(cè)設(shè)備包括哪些儀器設(shè)備試劑耗材？
軍團(tuán)菌檢測(cè)設(shè)備包括軍團(tuán)菌檢測(cè)儀器和設(shè)備以及軍團(tuán)菌培養(yǎng)基、軍團(tuán)菌生化鑒定套裝、軍團(tuán)菌診斷血清等產(chǎn)品。
軍團(tuán)菌檢測(cè)設(shè)備在WS 394-2012 公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范附錄B中有詳細(xì)說(shuō)明。
WS 394-2012 公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范
附 錄B（規(guī)范性附錄）集中空調(diào)系統(tǒng)冷卻水、冷凝水中嗜肺軍團(tuán)菌檢驗(yàn)方法
11.1 B.1 總則
本附錄規(guī)定了用培養(yǎng)法定性測(cè)定集中空調(diào)系統(tǒng)冷卻水、冷凝水及其形成的沉積物、軟泥等樣品中的嗜肺軍團(tuán)菌，其他洗浴水、溫泉水、景觀水等樣品中的嗜肺軍團(tuán)菌測(cè)定可參照?qǐng)?zhí)行。
11.2 B.2 術(shù)語(yǔ)和定義
下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本方法。
B.2.1
嗜肺軍團(tuán)菌 legionella pneumophila
樣品經(jīng)培養(yǎng)在GVPC瓊脂平板上生成典型菌落，并在BCYE瓊脂平板上生長(zhǎng)而在L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長(zhǎng)，進(jìn)一步經(jīng)生化實(shí)驗(yàn)和血清學(xué)實(shí)驗(yàn)鑒定確認(rèn)的菌落。
11.3 B.3 儀器和設(shè)備
B．3.1 平皿：Φ90 mm。
B．3.2 CO2培養(yǎng)箱：35℃～37℃。
B．3.3 紫外燈：波長(zhǎng)360 nm±2 nm。
B．3.4 濾膜過(guò)濾器。
B．3.5 無(wú)菌濾膜：孔徑0. 22 μm~0. 45 μm。
B．3.6 真空泵。
B．3.7 離心機(jī)。
B．3.8 渦旋振蕩器。
B．3.9 普通光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡。
B．3. 10 水浴箱。
B．3. 11 廣口采樣瓶：玻璃或聚乙烯材料，磨口，容積500 mL。
11.4 B.4 培養(yǎng)基和試劑
B．4,1 GVPC瓊脂平板。
B．4.2 BCYE瓊脂平板。
B．4.3 BCYE-CYE瓊脂平板。
B．4.4 革蘭氏染色液。
B．4.5 馬尿酸鹽生化反應(yīng)管(軍團(tuán)菌生化鑒定套裝）。
B．4.6 軍團(tuán)菌分型血清試劑。
B．5.1 將廣口采樣瓶（B．3.11）用前滅菌。
B．5.2 每瓶中加入Na2S203溶液（c=0.1 mol/L）O.3 ml_～0.5 mL，中和樣品中的氧化物。
B．5.3 水樣采集位置：冷卻水采樣點(diǎn)設(shè)置在距塔壁20 cm、液面下10 cm處，冷凝水采樣點(diǎn)設(shè)置在排水管或冷凝水盤處。
B．5.4 每個(gè)采樣點(diǎn)依無(wú)菌操作取水樣約500 mL。
B．5.5 采集的樣品2d內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，不必冷凍，但要避光和防止受熱，室溫下貯存不得超過(guò)15 d。
11.6 B.6 檢驗(yàn)步驟
B．6.1 樣品的沉淀或離心：如有雜質(zhì)可靜置沉淀或1000 r/min離心1 min去除。
B．6.2 樣品的過(guò)濾：將經(jīng)沉淀或離心的樣品通過(guò)濾膜（B．3.5）過(guò)濾，取下濾膜置于15 mL滅菌水中，充分洗脫，備用。
B．6.3 樣品的熱處理：取1 mL洗脫樣品，置50℃水?。˙．3.10）加熱30 min。
B．6.4 樣品的酸處理：取5 mL洗脫樣品，調(diào)pH至2.2，輕輕搖勻，放置5 mm。
B．6.5 樣品的接種：取洗脫樣品（B．6.2）、熱處理樣品（B．6.3）及酸處理樣品（B．6.4）各0. 1 mL，分別接種GVPC平板（B．4.1）。
B．6.6 樣品的培養(yǎng)：將接種平板靜置于CO2培蕎箱（B．3.2）中，溫度為35℃-37℃，CO：濃度為2. 5%。無(wú)CO2培養(yǎng)箱可采用燭缸培養(yǎng)法。觀察到有培養(yǎng)物生成時(shí)，反轉(zhuǎn)平板，孵育10 d，注意保濕。
B．6.7 菌落觀察：軍團(tuán)菌生長(zhǎng)緩慢，易被其他菌掩蓋，從孵育第3天開始每天在顯微鏡（B．3．9）上觀察。軍團(tuán)菌的菌落顏色多樣，通常呈白色、灰色、藍(lán)色或紫色，也能顯深褐色、灰綠色、深紅色；菌落整齊，表面光滑，呈典型毛玻璃狀，在紫外燈下，部分菌落有熒光。
B．6.8 菌落驗(yàn)證：從平皿上挑取2個(gè)可疑菌落，接種BCYE瓊脂平板（B．4.2）和L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板（B．4.3），35℃～37℃培養(yǎng)2 d，凡在BCYE瓊脂平板上生長(zhǎng)而在L一半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長(zhǎng)的則為軍團(tuán)菌菌落。
B．6.9 菌型確定：應(yīng)進(jìn)行生化培養(yǎng)與血清學(xué)實(shí)驗(yàn)確定嗜肺軍團(tuán)菌。
生化培養(yǎng)：氧化酶（-／弱+），硝酸鹽還原（-），尿素酶（-），明膠液化（+）．水解馬尿酸。血清學(xué)實(shí)驗(yàn)：用嗜肺軍團(tuán)菌診斷血清進(jìn)行分型。
附錄G（規(guī)范性附錄）集中空調(diào)送風(fēng)中嗜肺軍團(tuán)菌檢驗(yàn)方法
16.1 G.1 總則
本附錄規(guī)定了用液體沖擊法測(cè)定集中空調(diào)系統(tǒng)送風(fēng)中的嗜肺軍團(tuán)菌。
16.2 G.2 術(shù)語(yǔ)和定義
下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本方法。
G.2.1
嗜肺軍團(tuán)菌 legionella pneumophila
樣品經(jīng)培養(yǎng)在GVPG瓊脂平板上生成典型菌落，并在BCYE瓊脂平板上生長(zhǎng)而在L-半光氨酸缺失的BCYE瓊脂平板不生長(zhǎng)，進(jìn)一步經(jīng)生化實(shí)驗(yàn)和血清學(xué)實(shí)驗(yàn)鑒定確認(rèn)的菌落。
16.3 G.3 儀器和設(shè)備
G.3.1 微生物氣溶膠濃縮器：采樣流量≥100 L/min.，對(duì)于直徑3.0μm以上粒子其捕集效率≥80%或濃縮比≥8。
G.3.2 液體沖擊式微生物氣溶膠采樣器：采樣流量7 L/min-15 L/min.，對(duì)于0.5μm粒子的捕集效率≥90%。
G.3.3 離心管：容積50 mL。
G.3.4 平皿：Φ90 mm。
G.3.5 CO2培養(yǎng)箱：35℃～37℃。
G.3.6 紫外燈：波長(zhǎng)360 nm±2 nm。
G.3.7 渦旋振蕩器。
G.3.8 普通光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡。
G.3.9 水浴箱。
16.4 G.4 試劑和培養(yǎng)基
G.4.1 采樣吸收液1-GVPC液體培養(yǎng)基
G.4.1.1 GVPC添加劑成分：
多粘菌素B硫酸鹽 10 mg
萬(wàn)古霉素 0.5 mg
放線菌酮 80 mg
G.4.1.2 BCYE添加劑成分：
α一酮戊二酸 1．0 g
N-2酰胺基一2胺基乙烷磺酸（ACES） 10.0 g
氫氧化鉀 2. 88 g
L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.4 g
焦磷酸鐵 0. 25 g
G.4.1.3 吸收液成分：
活性碳 2g
酵母浸出粉 10 g
GVPC添加劑 見G.4.1.1
BCYE添加劑 見G.4.1.2
蒸餾水 1000 mL
G.4.1.4制法：將活性碳、酵母浸出粉加水至1 000 mL，121℃下高壓滅菌15 min，加入GVPC添加劑（G．4.1.1）和BCYE添加劑（G.4.1.2），分裝于滅菌后的離心管（G.3.3）中備用。
G.4.2 采樣吸收液2-酵母提取液
G.4.2.1 吸收液成分：
酵母浸出粉 12 g
蒸餾水 1 000 mL
G.4.2.2制法：將酵母浸出粉加水至1 000 mL，121℃下高壓滅菌15 min，分裝于滅菌后的離心管（G.3.3）中備用。
G.4.3 鹽酸氯化鉀溶液[c（HCI·KCI） =0. 01 mol/L]
G.4.3.1成分：
鹽酸（0.2 mol／L） 3.9 ml_,
氯化鉀（0.2 mol/L） 20 mL
G.4.3.2制法：將上述成分混合，用1mol/L）氫氧化鈉調(diào)整pH=2.2±0.2，121℃下高壓滅菌15 min備用。
G.4.4 其他試劑
G.4.4.1 GVPC瓊脂平板。
G.4.4.2 BCYE瓊脂平板。
G.4.4.3 BCYE-CYE瓊脂平板。
G.4.4.4 革蘭氏染色液。
G.4.4.5 馬尿酸鹽生化反應(yīng)管。
G.4.4.6 軍團(tuán)菌分型血清試劑。
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