化妝品實驗室微生物檢測的注意事項

主要內(nèi)容分為兩大項：實驗室布局和常見問題的問答。
一.   實驗室布局
關于化妝品微生物實驗室建筑技術的要求，可以參考GB 50346-2011《生物安全實驗室建筑技術規(guī)范》，其中對生物安全實驗室的分級、分類和技術指標做出了很明確的闡述。
二.   常見問題的問答
①.  問：不同培養(yǎng)基的滅菌條件不一致，是否可以合并成一個滅菌條件？
答：根據(jù)2015版《化妝品安全技術規(guī)范》，培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基滅菌條件有三種，如下表1，如果沒有遵從如下滅菌條件，可能會導致最后的培養(yǎng)結果有偏離。
表1  每種微生物培養(yǎng)所需的培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件	微生物種類	培養(yǎng)基名稱	滅菌條件
36℃±1℃培養(yǎng)48h±2h	菌落總數(shù)Aerobic Bacterial Count	卵磷脂、吐溫80—營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基	121℃高壓滅菌20min
44.5℃±0.5℃培養(yǎng)24h±2h	耐熱大腸菌群Thermotolerant Coliform Bacteria	雙倍乳糖膽鹽（含中和劑）培養(yǎng)基	115℃高壓滅菌20min
		伊紅美蘭（EMB）瓊脂	121℃高壓滅菌15min
		蛋白胨水（作靛基質試驗用）	121℃高壓滅菌15min
36℃±1℃、42℃±1℃	銅綠假單胞菌Pseudomonas Aeruginosa	SCDLP液體培養(yǎng)基	121℃高壓滅菌20min
		十六烷基三甲基溴化銨培養(yǎng)基	115℃高壓滅菌20min
		乙酰胺培養(yǎng)基	121℃高壓滅菌20min
		綠膿菌素測定用培養(yǎng)基	115℃高壓滅菌20min
		硝酸鹽蛋白胨水培養(yǎng)基	115℃高壓滅菌20min
		明膠培養(yǎng)基	115℃高壓滅菌20min
--	金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus	SCDLP液體培養(yǎng)基	121℃高壓滅菌20min
		營養(yǎng)肉湯	121℃高壓滅菌15min
		7.5%的氯化鈉肉湯	121℃高壓滅菌15min
		Baird Parker平板	121℃高壓滅菌15min
		甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基	115℃高壓滅菌20min
28℃±2℃培養(yǎng)5d	霉菌和酵母菌Molds and Yeast Count	虎紅（孟加拉紅）培養(yǎng)基	121℃高壓滅菌20min

②. 問：在實際工作中，由于一些原因導致微生物培養(yǎng)時間與標準規(guī)定培養(yǎng)時間不一致，培養(yǎng)結果是否可以接受？
答：同樣依據(jù)表1，如果培養(yǎng)時間與標準規(guī)定培養(yǎng)時間不一致，如實際培養(yǎng)時間多余或少于標準規(guī)定的時間范圍都會影響試驗結果。因為一般的微生物在一個相對穩(wěn)定的環(huán)境中的生長曲線是“S”形，培養(yǎng)時間多一些或少一些可能會對試驗結果有重大影響，別人也無法重復試驗結果。
③.   問：微生物培養(yǎng)箱能否放置在接種室？
答：不能。會有交叉污染的風險，此外如果接種室是利用臭氧來消毒的話，臭氧會影響培養(yǎng)箱里面正在培養(yǎng)的微生物。
④.   問：霉菌培養(yǎng)箱、細菌培養(yǎng)箱能否放置在同一個房間培養(yǎng)？
答：可以。有條件的話可以分不同的房間。
⑤.   問：霉菌和細菌是否可以用同一個培養(yǎng)箱培養(yǎng)？（分時段單獨培養(yǎng)）
答：不可以。通過表2就可知，雖然霉菌培養(yǎng)箱和生化培養(yǎng)箱具備培養(yǎng)細菌、霉菌、酵母菌的能力，但是一般的微生物檢測是細菌、霉菌和酵母同時進行，如果用同一個培養(yǎng)箱分時段單獨培養(yǎng)很難證明試驗結果的有效性；同時，企業(yè)的生產(chǎn)一般是連續(xù)的，導致微生物檢驗也是連續(xù)的，一個培養(yǎng)箱也滿足不了實際質控的要求。
表2 三種培養(yǎng)箱的對比

培養(yǎng)箱種類	適用的微生物	特點
恒溫培養(yǎng)箱	細菌	溫控范圍：室溫5℃-60℃，只能把溫度穩(wěn)定在室溫以上，不帶制冷，不帶控濕和不帶殺毒功能
霉菌培養(yǎng)箱	細菌、霉菌、酵母菌	雙制式冷熱控溫，有控濕有用殺毒功能
生化培養(yǎng)箱	細菌、霉菌、酵母菌	雙制式冷熱控溫，不帶控濕和不帶殺毒功能

⑥.   問：如何對培養(yǎng)箱進行消毒？
答：培養(yǎng)箱需要定期消毒。一般的消毒劑為75%的酒精；由于培養(yǎng)箱內(nèi)膽材料一般為不銹鋼，所以不適合用次氯酸鈉或苯扎溴銨，因為這些消毒劑對不銹鋼有腐蝕性。
⑦.   問：對于外購的培養(yǎng)基，開瓶之后的可以保存多久？
答：對于外購的培養(yǎng)基，開瓶之后的有效期需要經(jīng)過驗證才能確定，一般情況下開瓶之后一年內(nèi)都可以使用。
⑧.   問：滅菌后的培養(yǎng)基的可以保存多久？
答：滅菌后的培養(yǎng)基的有效期同樣也需要驗證，一般經(jīng)驗為冰箱4℃可以保持3個月，室溫1個月。用來封口的塞子最好是規(guī)格統(tǒng)一的，不然驗證就沒有意義。
⑨.   問：可以使用微波爐來溶解培養(yǎng)基嗎？
答：滅菌后的培養(yǎng)基室溫放置一段時間后會凝固，使用前需要溶解，通常采用水浴的方式。使用微波爐也可以，不過需要驗證。
⑩.   問：培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的培養(yǎng)皿是正著放置還是倒著？
答：培養(yǎng)箱中培養(yǎng)的培養(yǎng)皿需倒扣，第一有利于微生物向上吸收營養(yǎng)物質，第二避免培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水污染微生物。
⑪.  問：什么時候需要做空白對照和陽性對照？
答：微生物試驗都要求做空白對照；但是不同的參考標準對陽性對照規(guī)定不一樣，中國藥典規(guī)定需要做陽性對照，美國藥典、歐洲藥典和日本藥典沒有強制規(guī)定。
⑫.   問：一般的微生物檢驗室需要生物安全柜嗎？
答：不一定。微生物檢驗室的分類及所需的主要設備，如表3。
表3微生物檢驗室的分類及所需的主要設備

微生物室種類	主要設備
無菌室	超凈工作臺（或者隔離器），集菌儀；
微生物限度室	超凈工作臺（或者隔離器），一般薄膜過濾系統(tǒng)，振搖儀（也可以手動振搖不需要配置，根據(jù)企業(yè)情況），混合器；
陽性室	生物安全柜，混合器。

⑬.   問：該怎么選擇合適的生物安全柜？
答：對于實驗室生物安全柜的安裝及使用，在GB 50346-2011《生物安全實驗室建筑技術規(guī)范》中有很詳細的說明，表4為生物安全實驗室選用生物安全柜的原則。為了更多的了解生物安全柜的知識，可以閱讀JG 170-2005《生物安全柜》和YY 0569-2011《II級生物安全柜》等資料。
表4生物安全實驗室選用生物安全柜的原則

防護類型	選用生物安全柜類型
保護人員，一級、二級、三級生物安全防護水平	I級、II級和III級
保護人員，四級生物安全防護水平，生物安全柜型	III級
保護人員，四級生物安全防護水平，正壓服型	II級
保護實驗對象	II級、帶流層和III級
少量的、揮發(fā)性的放射和化學保護	II級B1，排風到室外的II級A2
揮發(fā)性的放射和化學保護	I級、II級B2和III級

 
原文來源Intertek 天祥集團： http://www.intertek.com.cn/news-info_14_1676.html 
廈門敏測實驗器材公司供應化妝品微生物檢測儀器耗材培養(yǎng)基：http://marketersbliss.com/anquan/238.html
微生物常見問題問答--節(jié)選自廣東藥檢所2010藥典微生物專題問答http://marketersbliss.com/anquan/200.html
廣東省藥檢所對《中國藥典》2010版微生物專題培訓班的有關問題解答。http://marketersbliss.com/anquan/198.html